Monat 2
Lesestoff:
Kapitel 3 (Proteine), Kapitel 4 (DNA, Chromosomen und Genome) sowie Kapitel 5 (Replikation, Reparatur und Rekombination von DNA) von "Molekularbiologie der Zelle" sowie die Papers:
- De novo design of potent and selective mimics of IL-2 and IL-15 (Daniel-Adriano Silva)
- Dynamic Personalities of Proteins (Katherine Henzler-Wildman & Dorothee Kern)
- Genetical Implications of the structure of Deoxyribo nucleic acid (J. D. Watson and F. H. C. Crick)
- Central Dogma of Molecular Biology (Francis Crick)
- Junk or functional DNA? ENCODE and the function controversy (Pierre-Luc Germain • Emanuele Ratti • Federico Boem)
- What Does It Mean to Be 75% Pumpkin? The Units of Comparative Genomics (Monika Piotrowska)
Hands-On:
Experiment 1: Ausstreichen von E. Coli Bakterien auf LB-AGAR Petrischalen:
Im Kursmaterial wurden 2 Proben von E. Coli (DH5α und pJE202 Stämme) geliefert welche im Laborkühlschrank bei 4°C aufbewahrt werden. Zur weiteren experimentellen Verwendung werden Kulturen angelegt.
Da es sich herbei um gentechnisch veränderte, nicht-pathogene Laborstämme handelt, werden diese aufgrund der Risikobeurteilung gemäss BSL1 Regeln behandelt.
Der DH5α Stamm wird mittels steriler Einwegimpöse aus der Probe entnommen und auf auf LB AGAR Medium ausgestrichen und im Inkubator 2 Tage bei 37°C vermehrt:
Gleiches mit dem pJE202 Stamm der auf LB AMP (Ampicillin) AGAR Medium ausgestrichen und 3 Tage bei RT (20°C) vermehrt wird:
E. Coli mit pJE202 enthält Gene von Aliivibrio fischeri. Diese sind daher biolumineszent und leuchten im Dunkeln. Das Enzym welches das Licht erzeugt heisst Luciferase.
Zur späteren Verwendung werden die Kulturen im Laborkühlschrank bei 4°C aufbewahrt.
Experiment 2 - Zucht von biolumineszenten Bakterien in Nährlösung:
Aus der im Experiment 1 erstellten Kultur von E. coli pJE202 wird mittels steriler Einwegimpföse eine Kolonie entnommen und in frisch angesetzter LB AMP (Ampicillin) Nährlösung eingebracht.
Nach 2 Tagen bei 20°C hat sich die Kultur soweit vermehrt, dass Biolumineszenz sichtbar wird.
